ELISA test tuvastab arvukalt haigusi, mistõttu on see leidnud laialdast rakendust meditsiinis ja mujalgi. ELISA test on aga kõige paremini tuntud puukborrelioosi diagnoosimise tõttu. Mis on ELISA test? Kuidas tulemusi tõlgendada? Mis on testi hind?
Sisukord:
- ELISA test - mida see tuvastab? ELISA testi rakendamine
- ELISA test - mis on test?
- ELISA test ja puukborrelioos - millal teha?
- ELISA test - hind. Kui palju ELISA test maksab?
- ELISA test - tulemused. Kas need võivad olla valepositiivsed?
- ELISA test - tulemused. Kas need võivad olla valenegatiivsed?
ELISA test, see tähendab ensüümidega seotud immunosorbentanalüüs, on tavaliselt kasutatav laborimeetod, mida kasutatakse muu hulgas antikehade kvantitatiivseks tuvastamiseks veres.
Sel põhjusel on ELISA test leidnud rakendust bakteriaalsete haiguste, näiteks puukborrelioosi borrelioosi diagnoosimisel.
ELISA meetodi eeliseks on nii lihtsus ja kiire rakendamise võimalus kui ka kõrge tundlikkus. ELISA meetod viiakse läbi spetsiaalsete plastplaatide abil, mille süvendid on täidetud näiteks Borrelia valkudega (antigeenid) ja spetsiifiliste monoklonaalsete antikehadega, mis on mõeldud antikeha tuvastamiseks patsiendi proovis.
ELISA test - mida see tuvastab? ELISA testi rakendamine
ELISA meetodi kõrge tundlikkus ja lihtsus muutis selle rakendatavaks paljude haiguste diagnoosimisel, kuid kõige paremini on see tuntud puukborrelioosi diagnostilise meetodina.
Borrelioosi borrelioosi diagnoosi korral on nn kaudne ELISA, mis võimaldab testitavas materjalis tuvastada spetsiifilisi IgM või IgG. Samamoodi saab diagnoosimiseks tuvastada antikehi:
- viirusnakkused: herpesviirused (herpes, herpes zoster, Epstein-Barr, tsütomegaloviirus), HIV, hepatiidiviirused (HBV ja HCV)
- algloomade nakkused: toksoplasmoos, giardiaas
- autoimmuunhaigused: tsöliaakia (anti-tTG või anti-DPG antikehad), Hashimoto tõbi (anti-TG ja anti-TPO antikehad), põletikulised soolehaigused (anti-ASCA ja anti-ANCA antikehad)
- parasiithaigused ja allergiad, milles tuvastatakse spetsiifilised IgE antikehad. Nende suurenenud tase võib viidata allergiate esinemisele, nt õietolmu ja toidu suhtes, või parasiitide nakatumisele (relvastatud paeluss, inimese ümaruss)
Samuti on modifikatsioone ELISA meetodil (nn võileib-ELISA), mis võimaldavad tuvastada valkude proovi peale antikehade. Seejärel on testi eesmärk avastada bioloogilises materjalis:
- viiruste või bakterite fragmendid, enamasti on need antud patogeenile iseloomulikud antigeenid
- seerumihormoonid, näiteks östrogeen, prolaktiin, TSH, fT4, kortisool
- ensüümid, näiteks kalprotektiin, pankrease elastaas, aluseline fosfataas
- kasvaja markerid, näiteks CA-125
- ravimite olemasolu seerumis
See meetod on rakendatav ka toiduainetööstuses, kus see suudab toidus tuvastada allergeenide (nt piim, maapähklid), GMOde või toksiinide jälgi.
ELISA test - millega on tegemist?
Näiteks puukborrelioosi diagnoosimine ELISA meetodil seisneb immuunvalkude tuvastamises bioloogilises materjalis - antikehades, mis tekivad Borrelia antigeenide vastuse käigus.
Antikehasid testitakse kahes klassis, IgM ja IgG. IgM-id on bakteritega kokkupuutel esimesed kehas antikehad, mis aja jooksul vähenevad.
Nende koha võtavad püsivamad IgG antikehad, mis võivad kehas püsida mitukümmend aastat.
Sel viisil testitakse kaudselt bakterite olemasolu organismis, tuvastades spetsiaalselt Borrelia spirochetes'e vastu suunatud antikehad.
Infektsiooni erinevates etappides olevad antikehad võivad olla suunatud mitmesuguste Borrelia valkude vastu. Näiteks varajases staadiumis on see valk p41.
Hilisemates etappides hakkab ilmuma üha rohkem valke, näiteks p21, p30, p39, p43. Seetõttu on puukborrelioosi diagnoosimine äärmiselt keeruline.
Bakteriaalsete valkude valik on äärmiselt oluline, et testil oleks kõrge diagnostiline väärtus. Seetõttu tuleks puukborrelioosi diagnoosimisel tavapäraselt kasutada II või III põlvkonna ELISA teste, mille käigus valitakse kõige usaldusväärsema tulemuse saamiseks valkude komplektid.
ELISA test ja puukborrelioos. Millal teha?
Puukborrelioos on bakteriaalne haigus, mille põhjustavad bakterid Borrelia burgdorferi ja paljud selle sordid.
Haiguse diagnoosimine pole Borrelia vastase immuunvastuse keerukuse ja laboratoorsete meetodite puuduste tõttu keeruline.
Kõige sagedamini kasutatav laborimeetod on ülitundlik ELISA meetod, mis tuvastab bakterivalkude vastu kasvanud spetsiifilised antikehad.
Borrelioosi diagnoosimisel kasutatakse kaudset ELISA-meetodit, milles eristatakse järgmisi etappe:
- plaatide süvendite inkubeerimine patsiendilt kogutud materjaliga, nt seerum. Kui testitud materjalis on Borrelia vastaseid antikehi, seonduvad need reaktsiooni süvendi valkudega
- seejärel loputatakse liigne seerum spetsiaalse pesuvedelikuga (puhver) ja nn konjugaat, st antikeha, mis on seotud ensüümiga, mis seondub reaktsioonikaevudes varem seotud antikehadega
- siis lisatakse konjugaadi substraat ja toimub värvireaktsioon (positiivne tulemus) või puudub värvireaktsioon (negatiivne tulemus)
- viimane etapp on lugeja (spektrofotomeetri) lugemine Borrelia vastaste antikehade kontsentratsioonist patsiendi seerumis
Borrelioosi ELISA test viiakse läbi verest ja neuroloogiliste sümptomite (neuroborrelioosi) korral ka tserebrospinaalvedelikust.
Sünoviaalvedelikku ei tohiks testida, kuna valepositiivsete tulemuste tõenäosus on suur.
Haiguse diagnoosimise aluseks on sellele viitavad kliinilised sümptomid, mida kinnitavad laborikatsete tulemused.
Ilma sümptomiteta laboratoorsete uuringute tulemuste lisamine ei võimalda puukborrelioosi diagnoosimist, kuna on tõestatud, et Borrelia vastaseid antikehi avastatakse ka tervetel inimestel.
Borrelioosi borrelioosi seroloogiline diagnoos algab poolkvantitatiivse sõelumis-ELISA testiga. Kui tulemus on negatiivne, tähendab see, et Borrelia spiroheesid ei ole avastatud või tulemus on valenegatiivne.
Kui tulemus on positiivne või nõrgalt positiivne (üheselt mõistetav), tuleks teha kinnitav Western blot test, mida iseloomustab kõrge spetsiifilisus.
See kinnitab, et ELISA tulemused on "tõesed". Diagnostika ajal ei saa te ühtegi ülaltoodud sammu vahele jätta ja näiteks teha diagnoosi kohe Western bloti meetodil või teha diagnoosi ainult positiivse ELISA tulemuse põhjal.
Poolas lõpeb puukborrelioosi diagnoosimine väga sageli esimesel sõeluuringul, mis põhjustab positiivsete või nõrgalt positiivsete tulemuste valet tõlgendamist.
Soovitatav artikkel:
Lümfotsüütide transformatsiooni test (LTT) Hea teadaELISA test - hind. Kui palju ELISA test maksab?
Test maksab umbes 60 Poola zlotti ja see tehakse kohe. Saate siiski suunamise tulemusi oodata umbes kolm kuud.
ELISA test - tulemused. Kas need võivad olla valepositiivsed?
Vale positiivsed tulemused tulenevad IgM antikehade ristreaktiivsusest teiste valkudega. Keha poolt toodetud antikehad võivad Borrelia antigeenina "valesti" ära tunda teiste mikroorganismide antigeeni.
Kõige tavalisemad "vead" esinevad inimestel, kes on nakatunud treponema pallidum'iga, herpesviirustega ning süsteemse erütematoosluupuse ja muude reumaatiliste haigustega inimestel.
ELISA test - tulemused. Kas need võivad olla valenegatiivsed?
Infektsiooni varases staadiumis võivad ilmneda valenegatiivsed tulemused, seejärel tuleks testi korrata umbes 3-4 nädala pärast. Seda nimetatakse seroloogiline aken, see on nakkuse esialgne periood, mille jooksul organism pole veel "suutnud" spetsiifilisi antikehi toota.
Samamoodi immuunpuudulikkusega inimestel, kes ei tooda piisavalt antikehi.
Suur probleem, eriti väga intensiivsete infektsioonide korral, on nn immuunkompleksid, mis koosnevad Borrelia antigeenidest ja nende jaoks spetsiifilistest antikehadest.
Selle tulemusena muutuvad antikehad "nähtamatuks" selliste tavapäraste meetodite puhul nagu ELISA ja kuigi neid on testitud materjalis, ei saa neid tuvastada.
Sellistel juhtudel võib labor kasutada immuunkomplekside lagundamist. See ravi on mõeldud antikehade vabastamiseks. Kuid seda meetodit ei kasutata laialdaselt laborite standardimise puudumise tõttu.
Tasub teadaMiks pole puukborrelioosi diagnoosimine lihtne?
See on tingitud Borrelia vastase immuunvastuse keerukusest ja laboratoorsete meetodite piiratusest. Sortide mitmekesisus ja nakkusi põhjustavate uute ilmumine, eriti Euroopa mandril, ei hõlbusta tõhusate diagnostikameetodite väljatöötamist.
Hiljuti on Euroopas ilmunud rohkem sorte, näiteks Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana ja Borrelia spielmanii. Lisaks võivad Borrelia spiroheedid kehas muutuda tsüstideks või jääda keha kohtadesse, kuhu immuunsüsteemi rakud ei pääse.
Olles seega immuunsüsteemile "nähtamatu". Pealegi on näidatud, et koed võivad sisaldada väga põletikku soodustavate omadustega bakterite fragmente. Arvatakse, et nad vastutavad borrelioosi krooniliste sümptomite eest, hoolimata laboratoorsete testide negatiivsetest tulemustest.
Kirjandus
1. Witecka-Knysz E. jt. Puukborrelioos: miks on diagnoosimine nii keeruline? Laboridiagnostik aprill 2007.
2. Moore A. jt. Ameerika Ühendriikide puukborrelioosi laboratoorseks diagnoosimiseks kehtivad juhised, tavalised kliinilised lõkse ja tulevased juhised. Erakorraline nakkushaigus 2016 juuli; 22 (7).
3. Puukide kaudu levivate haiguste laboridiagnostika. Töörühma soovitused: Riiklik laboridiagnostikute koda, Riiklik rahvatervise instituut-riiklik hügieeniinstituut, nakkushaiguste riiklik konsultant, nakkushaiguste ja neuroinfektsioonide osakond, Białystoki Meditsiiniülikool, Poola Viroloogia Selts, Varssavi 2014
4. Hosseini S. jt: Ensüümidega seotud immunosorbentanalüüs (ELISA) A-st kuni Z. Springer 2017.
